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PCR实验中需要准备哪些实验耗材？

2024-10-30 16:18:57

1971 年，KEPPE等研究者概述了PCR理论过程。过了 14 年之后，Kary Mullis于 1985 年在 Cetus 公司对完整的 PCR 过程进行了描述和实验应用。

如今，PCR 已成为生物科学领域不可或缺的工具。PCR 改变了科学的进程，使生物学家能够控制基因组，创造具有新功能的杂交基因，进行特异性和准确的临床测试，深入了解基因组和多样性，以及复制基因以进行进一步的生化分析。

PCR反应虽然简单易操作，但也存在使反应复杂化并产生错误结果的情况。如果PCR实验操作有误或选择的工具不合适，那么可能会产生非特异性 DNA 产物。除此之外，若反应产物中混入了其他杂质，将会导致 PCR 产物的异质性。

PCR 的基本原理及实验过程中该准备的耗材

设置PCR反应

在PCR 管或PCR板中准备样品、引物、酶和其他试剂的混合物。

扩增 DNA 或 RNA

使用热循环仪对混合物进行一系列温度循环，在此期间，DNA 或 RNA 在酶的作用下进行扩增。

变性（96 ℃ ）：强烈加热反应以分离或变性 DNA 链。这为下一步提供了单链模板。

退火（55℃-65℃）：冷却反应，使引物与单链模板 DNA 上的互补序列结合。

延申（72 ℃ ）：提高反应温度，使Taq聚合酶延长引物，合成新的 DNA 链。

分析扩增产物

扩增完成后，可使用凝胶电泳或实时 PCR 等多种技术分析扩增的 DNA 或 RNA。

在高精度PCR实验过程中，选择合适的实验耗材，不仅防止样品蒸发，保护微孔板内样品不受污染，而且还帮助研究人员可以快速、准确地扩增样品中的特定DNA或RNA序列，从而提高实验室工作效率以及成功率。

# PCR 管

PCR 管是一种小型、微型塑料管，可用作热循环仪中 PCR 反应的容器。同时，还用于储存和稀释样品。PCR 管由聚丙烯制成，通常不含 DNase 和 RNase。PCR 管由尖底、管帽和光滑均匀的超薄管壁组成，这确保对样品持续、最佳的热传递。紧密贴合的管帽密封严实，可防止样品蒸发。市面上的PCR 管与大多数品牌的热循环仪兼容，并可进行高压灭菌，广泛用于qPCR、RT-PCR和测序等。

# 封板膜

在 PCR、核酸提取和高通量测序等技术的热循环和储存过程中，热封膜用于 PCR 板和其他微孔板的密封。封板膜可减少样品的蒸发，从而确保最小的样品损失。封板膜有不同的种类和密封方法。

第一种：由透明塑料制成的薄膜，用户可以清楚地观察样品，如压敏膜。

第二种：由薄而不透明的铝制成的密封膜，可限制光线的穿透，如热封膜。

这两种类型都可以通过涂在封条上的密封粘合剂或使用热封装置粘附到PCR板上。

# 96 孔 PCR 板

96 孔 PCR 板是一种耐热、多孔的塑料微孔板，用于 PCR 仪或实时 (qPCR) 热循环仪中。这种平板有多种形式，如带裙板、半带裙板、无裙板、透明和彩色等。将不同类型的热封膜或薄膜，通过热封仪或刮板粘合至PCR板上进行密封。大多数 PCR 板不含 DNases、RNases 或无DNA。使用之前，客户应确认其热循环仪是否能适配裙板。

# 384 孔 PCR 板

384 孔 PCR 板是一种塑料多孔板，专为 PCR 或实时 PCR 应用而设计，可承受热循环仪的高温。与 96 孔板相比，384 孔板可容纳更多样品，非常适合高通量工作流程。大多数384孔板不含 DNases、RNases 或无 DNA。同样，在使用之前，客户应确认其热循环仪可以适配裙板。

# qPCR 板

qPCR 板是以孔板形式排列的微管，用于在 qPCR热循环仪中装载样品和反应。与 PCR 管一样，qPCR 板通常由高度精炼的聚丙烯制成，不含 DNase 和 RNase。此外，qPCR 板针对依靠荧光检测的实时热循环仪的光学特性进行了优化。qPCR 板可分为无裙板、半裙板和全裙板。最常见的是 96 孔格式，也有 384 孔的 qPCR 板，可以进行更高通量的检测。